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    • 小鼠VGF神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白(VGF)ELISA試劑盒

      規(guī)格：
      價格：￥
      • 品牌 : 通蔚生物
      • 目錄號 : TW-E4051
      • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
      • 英文名 ：Mouse VGF ELISA KIT
      • 貨期 : 現(xiàn)貨
      • 靈敏度 ：15.63pg/mL
      • 規(guī)格 ：48T/96T
      • 檢測范圍 ：31.25 ~ 2000pg/mL
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    小鼠VGF神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白(VGF)ELISA試劑盒
    簡介
    VGF（神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白）是一種由神經(jīng)生長因子（NGF）調(diào)控的基因序列，其在成年大鼠大腦中被發(fā)現(xiàn)并廣泛表達(dá)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中，VGF是一種分泌型神經(jīng)肽，屬于神經(jīng)肽谷氨酰胺家族，由前體多肽經(jīng)過加工后產(chǎn)生多種生物活性肽，這些肽在神經(jīng)發(fā)生、突觸可塑性、神經(jīng)保護(hù)以及疾病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。
    檢測原理
    本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測物VGF，清洗后，再加入生物素標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育，待孵育結(jié)束后清洗，接著加入TMB顯色后，若樣本中有待測物則顯藍(lán)色，加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值，顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中VGF的濃度。
    需要的其他材料
    1.  酶標(biāo)儀，包含450nm測定波長，同時包含600-680nm校正波長更佳；
    2.  移液器及槍頭；
    3.  蒸餾水或去離子水；
    4.  100-1000 mL刻度量筒；
    5.  洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機(jī)；
    6.  水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
    7.  用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
    樣品保存
    樣品收集后若在 1 周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。
    試劑準(zhǔn)備工作
    使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
    洗滌液/稀釋液配置
    如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
    標(biāo)準(zhǔn)品配置
    試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個試管，先從40ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至2000pg/mL（例：50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的2000pg/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨(dú)的試管中將2000pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為: 2000pg/mL、 1000pg/mL、 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0pg/mL)。

    小鼠(VGF)ELISA試劑盒

    抗體工作液配置
    使用前10分鐘，將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液，根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。
    酶結(jié)合物工作液配置
    使用前10分鐘，將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘，隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液，根據(jù)所需用量配置。
    備 注：如待測樣本中VGF濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
    結(jié)果的計算
    計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時去掉空白組的值)?；蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
    若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
    示例數(shù)據(jù)

    以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)

    2000

    1000

    500

    250

    125

    62.5

    31.25

    0

    OD值

    2.581

    1.689

    1.09

    0.607

    0.43

    0.292

    0.149

    0.05

    校正OD值

    2.531

    1.639

    1.04

    0.557

    0.38

    0.242

    0.099

    0


    下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例，結(jié)果計算應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計算樣本結(jié)果

    小鼠(VGF)ELISA試劑盒

    重復(fù)性
    板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于10%。
    靈敏度
    經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為15.63pg/mL。
    特異性
    該試劑盒測定可識別重組小鼠VGF。
    其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL，并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
    使用ELISA試劑盒之前，請您必須完整閱讀說明書，本產(chǎn)品僅供科研使用，不能于臨床診斷或治療。