ELISA，作為一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究的免疫測(cè)定方法，其結(jié)果的準(zhǔn)確性極易受到污染的影響。污染不僅會(huì)導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果，還會(huì)浪費(fèi)寶貴的試劑和時(shí)間，甚至誤導(dǎo)研究方向。本文將詳細(xì)分析ELISA污染的可能原因，并提供相應(yīng)的預(yù)防和解決措施，以幫助研究人員提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

ELISA實(shí)驗(yàn)污染的可能原因

ELISA實(shí)驗(yàn)中污染可能導(dǎo)致假陽性、假陰性或高背景等問題，常見原因可歸納為以下幾類：

試劑相關(guān)污染

1、試劑污染

• 微量反應(yīng)板或試劑（如酶標(biāo)抗體、顯色劑）制備過程中被細(xì)菌、灰塵或交叉試劑污染。
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• 顯色劑（如TMB）提前接觸HRP酶，導(dǎo)致底物變質(zhì)或非特異性顯色。
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• 試劑保存不當(dāng)（如未避光、未冷藏），或過期失效。

2、試劑交叉干擾

• 補(bǔ)體（如C1q）未被滅活，可能非特異性結(jié)合抗體導(dǎo)致假陽性。
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• 試劑盒組分混用（如不同指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)板混用）。

操作步驟污染

1、加樣污染

• 加樣時(shí)未更換槍頭，導(dǎo)致樣本或試劑交叉污染。
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• 全自動(dòng)加樣設(shè)備使用重復(fù)性鋼針未徹底清洗，殘留強(qiáng)陽性樣本拖帶污染其他孔（如HIV檢測(cè)中探針殘留）。

2、洗滌不充分

• 洗滌次數(shù)不足或洗液殘留未拍干，導(dǎo)致非特異性結(jié)合物質(zhì)殘留。
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• 洗板浸泡時(shí)間過短，或洗液稀釋比例錯(cuò)誤。

3、孵育條件不當(dāng)

• 溫度過高（如恒溫箱溫度超過37.5℃）或時(shí)間過長(zhǎng)，加速非特異性反應(yīng)。
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• 顯色步驟未避光，導(dǎo)致顯色劑異常氧化

樣本處理問題

1、標(biāo)本本身污染

• 樣本溶血（紅細(xì)胞釋放過氧化物酶干擾HRP系統(tǒng)）或細(xì)菌污染。
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• 血清/血漿中脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白等成分干擾檢測(cè)。

2、標(biāo)本保存不當(dāng)

• 長(zhǎng)期冷藏導(dǎo)致IgG聚合或多聚體形成（如AFP二聚體），增加背景值。
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• 反復(fù)凍融未充分混勻，導(dǎo)致局部蛋白濃度異常。

設(shè)備及環(huán)境因素

• 儀器參數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤
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• 酶標(biāo)儀光密度范圍設(shè)置過寬（如超過OD3.5），導(dǎo)致背景信號(hào)誤讀。
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• 增益值過高，放大噪聲信號(hào)。

實(shí)驗(yàn)環(huán)境干擾

• 空氣中灰塵或揮發(fā)性物質(zhì)污染板孔。
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• 操作臺(tái)面或加樣槽未清潔，殘留污染物。

其他干擾因素

• 交叉反應(yīng)物質(zhì)：如類地高辛、類AFP等與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)，尤其在單克隆抗體檢測(cè)中易引發(fā)假陽性。
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• 纖維蛋白殘留：血液未完全凝固即離心，殘留纖維蛋白原形成假陽性信號(hào)。

了解ELISA實(shí)驗(yàn)常見的污染原因，并采取相應(yīng)的預(yù)防和解決措施，才能有效避免假陽性或假陰性結(jié)果，最終提高實(shí)驗(yàn)效率和數(shù)據(jù)可靠性。